大白菜KASP反应体系的优化与建立

作者：杨双娟; 原玉香; 魏小春; 王志勇; 赵艳艳; 姚秋菊; 张晓伟^*

来源：园艺学报, 2018, 45(12): 2442-2452.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0274

• 大白菜
• KASP
• 反应体系优化

以大白菜基因组DNA为模板,对影响竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive allele specific PCR,KASP)的反应体积、引物浓度和DNA模板用量等3个参数进行优化,建立了适用于大白菜的KASP反应体系。96孔模块最佳反应体系中,总反应体积为8μL,其中模板DNA(60～80 ng·μL-1)1μL,KASP Master mix(2×)4μL,引物混合物(50μmol·L-1)0.14μL,ddH2O 3μL。384孔模块最佳反应体系中,总反应体积为4μL,其中模板DNA(60～80 ng·μL-1)1μL,KASP Master mix(2×)2μL,引物混合物(50μmol·L-1)0.07μL,ddH2O 1μL。利用不同引物和不同的大白菜材料对优化的反应体系进行验证,均获得了较好的KASP-SNP分型,验证了该优化体系的稳定性。该反应体系可以用于大白菜遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱构建等遗传学研究。

• 出版日期2018
• 单位河南省农业科学院