甘薯叶片原生质体快速制备方法的优化

作者:赵昊; 周晓晴; 马遇乐; 蔡梦琪; 王爱华*
来源:青岛农业大学学报(自然科学版), 2023, 40(04): 283-287.

摘要

原生质体由于没有细胞壁,在植物育种、遗传转化以及基础研究中都有极为广泛的用途。常用的酶解法制备原生质体需要的时间较长,缩短原生质体的制备时间对后续的瞬时表达、植物育种等相关实验具有重要意义。本文以甘薯[Dioscorea esculenta(Lour.) Burkill]叶片为材料,通过调整叶片处理方式、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体的制备方法进行了优化,旨在建立一种快速制备甘薯原生质体的方法。结果表明:利用优化的原生质体制备方法可将20 h的酶解时间缩短到2 h;优化的条件为撕去甘薯叶片下表皮后再进行酶解,使用含1.8%纤维素酶R-10+0.9%离析酶R-10酶溶液,在28℃条件下酶解,350×g离心力离心。