摘要

本发明公开谷氨酸棒杆菌中一种基因连续无痕敲除的方法,属于基因工程技术领域。本发明在谷氨酸棒杆菌中构建了核酸外切酶-重组酶-Cre/loxP连续无痕敲除系统,以RecET-Cre/loxP连续无痕敲除系统最佳。本方法在谷氨酸棒杆菌中的同源重组不需要质粒的介导,在RecET的协助下仅需转化入线性双链DNA即可完成同源重组;仅需要一轮转化,即可完成靶标基因的无痕敲除,整个无痕敲除过程仅需4~6天,同时能够完成基因的连续无痕敲除;利用抗性基因作为筛选标记筛选过程简单有效,相对于谷氨酸棒杆菌中的其他无痕敲除的方法更加简单,有效且节省时间。