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摘要
454焦磷酸测序已成为真菌群落结构研究的常用手段,文中对454焦磷酸测序的Barcoded PCR扩增中的模板质量浓度、Mg2+和引物浓度等反应条件进行了优化,并对扩增所得产物的特异性进行了鉴定;同时就不同Taq酶对测序结果的影响进行了讨论。结果表明:DNA模板经适度稀释能显著提高反应效率;Mg2+及引物浓度对扩增反应效率有影响,建议上下游引物浓度均为0.1μmol·L-1,Mg2+浓度可不做调整;使用特异性好、活性较强的Taq酶对保证扩增产物的真菌特异性至关重要,建议选用热启动Taq酶。
- 出版日期2014
- 单位绍兴文理学院; 中国科学院植物研究所; 东北林业大学
