启动子低甲基化介导NOL9过表达促进肝癌细胞增殖

作者：陈希瑶; 许镇; 邬喆斌; 张博翔; 彭亮; 谢婵^*

来源：新医学, 2023, 54(04): 287-293.

DOI：10.3969/j.issn.0253-9802.2023.04.011

• 肝细胞癌
• 核仁蛋白9
• 增殖
• 甲基化

目的 探讨核仁蛋白9(NOL9)在肝癌中的表达和对肝癌细胞增殖的影响，进一步阐明NOL9在肝癌中表达上调的分子机制。方法 选择7例肝癌患者的手术标本（癌组织和癌旁组织），通过蛋白免疫印迹法和反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NOL9在癌组织和癌旁组织中的表达水平；分别转染小干扰RNA(si-RNA)到肝癌Huh7和HCCLM3细胞，采用RT-qPCR、蛋白免疫印迹法、细胞集落形成实验、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析差异；利用TCGA数据库肝癌数据评估NOL9 mRNA表达水平和启动子的甲基化水平，同时评估NOL9和DNA甲基异位擦除蛋白家族（TET1、TET2和TET3）转录水平的相关性；采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹法检测DNA去甲基化试剂5-Aza-Dc处理后Huh7和HCCLM3细胞中NOL9表达水平的变化；5-Aza-Dc预处理后再转染si-RNA，采用细胞集落形成实验和CCK-8分析细胞增殖的差异。结果 NOL9在肝癌组织中表达上调；敲低NOL9能抑制肝癌Huh7和HCCLM3细胞增殖以及细胞集落形成（P均<0.01）；肝癌中NOL9启动子甲基化与其mRNA水平呈负相关，NOL9mRNA水平和一个CpG区域（cg07997941）呈负相关；在肝癌中，NOL9与TET1、TET2和TET3的转录水平均呈正相关；在给予5-Aza-Dc处理后，NOL9的表达上调；5-Aza-Dc的处理能逆转敲低NOL9对肝癌细胞增殖以及克隆形成的抑制作用。结论 NOL9在肝癌组织中高表达，敲低NOL9抑制了肝癌细胞的增殖和克隆形成，其上调机制可能与启动子低甲基化相关。

• 出版日期2023
• 单位中山大学附属第三医院