腺病毒载体纤突结的改造及改造后的特性研究

作者：乔伟; 何金生; 付远辉; 洪涛

来源：中国生物工程杂志, 2011, (06): 86-92.

• 复制缺陷型腺病毒载体
• RGD
• 荧光
• 抗体反应 Replication-defective adenovirus vector RGD Fluorensence Humoral immune response

目的:采用一种简便方法在复制缺陷型腺病毒载体纤突结(fibre knob)的HI loop插入精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-aspartate,RGD)肽,构建纤突结修饰的腺病毒载体,观察其对RD和T24肿瘤细胞的感染效率以及机体针对外源基因的抗体反应。方法:以PCR方法将RGD插入到pAdEasy-1后,通过常规方法构建可表达EGFP和人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialviruse,RSV)密码子优化型融合蛋白(fusion protein,Fsyn)的腺病毒载体FGAd-RGD-EGFP和FGAd-RGD-Fsyn。用FGAd-RGD-EGFP感染RD和T24肿瘤细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测感染效率,用FGAd-RGD-Fsyn免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测针对外源基因的抗体反应。结果:与FGAd-EGFP相比,FGAd-RGD-EGFP对RD和T24肿瘤细胞的感染效率都有显著提高,EGFP表达效率也明显增强。与FGAd-Fsyn相比,FGAd-RGD-Fsyn所引起的机体针对外源基因的抗体反应并无差异。结论:改造后的腺病毒载体能显著提高对RD和T24肿瘤细胞的感染效率,但并不引起机体产生针对外源基因的增强的抗体反应,该载体能用于肿瘤等疾病的基因治疗研究。

• 出版日期2011
• 单位安徽医科大学; 北京交通大学