PEI介导pCEP4/EGFP瞬时转染293-F细胞条件优化

作者：贺玉萍; 张航; 易晓红

来源：成都大学学报(自然科学版), 2015, 34(02): 105-107.

• pCEP4
• 转染
• 293-F细胞
• polyethylenimie(PEI)

为构建真核表达载体pCEP4/EGFP,PEI介导瞬时转染293-F细胞,观察转染效率,优化转染条件.通过NotI和Hind III酶切位点将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)插入真核表达载体p CEP4中,并转化Trans5α感受态细胞,氨苄青霉素筛选培养,挑取阳性克隆扩增后提取质粒,酶切鉴定正确后,PEI介导转染293-F细胞,流式细胞仪检测转染效率.实验结果表明,成功构建了真核表达载体pCEP4/EGFP,当N/P(PEI/DNA)为25,悬浮培养模式下转染293-F细胞,48 h转染效率为77.57%,重组载体p CEP4瞬时转染293-F细胞,可获得理想转染效果.

• 单位
  四川大学华西医院; 基础医学院; 生物治疗国家重点实验室; 成都中医药大学