高尔基体磷蛋白3通过整合素信号通路调控肝内胆管癌干细胞特性

作者：陈高辉; 朱志文; 阳亮芳; 郑杨; 何惠娟; 黄海丽; 包仕廷; 杨春燕^*; 戴维^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(10).

• 肝内胆管癌
• 高尔基体磷蛋白3
• 肿瘤干细胞
• 整合素

目的探究高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)对肝内胆管癌干细胞特性的影响及其机制。方法利用TCGA数据库(35例胆管癌组织和9例正常组织)分析GOLPH3在胆管癌中的表达。免疫组织化学分析25例胆管癌根治手术患者癌组织和癌旁组织中GOLPH3的表达模式。将GOLPH3敲低质粒和对照质粒转入肝内胆管癌细胞系(HuCCT1), 荧光显微镜和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。集落形成实验检测细胞增殖能力。肿瘤球形成实验和Western blot检测干细胞样特性。样本数据采用非配对t检验。结果 TCGA数据库中胆管癌组织的GOLPH3表达高于正常组织(P< 0.001)。敲低GOLPH3抑制了HuCCT1细胞的增殖能力和干细胞特性, 对照组的细胞克隆数目高于敲低组[(175.72±16.04)个比(67.33±5.69)个, t=11.024, P<0.01];对照组的肿瘤球平均直径高于敲低组[(244.43±38.82) μm比(131.32±19.86) μm, t=4.593, P<0.01];单层细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.75±0.07比0.39±0.08, t=4.304, P<0.05);单层细胞中对照组的CD44蛋白表达水平与敲低组比较, 差异无统计学意义(0.31±0.11比0.23±0.09, t=0.916, P>0.05);球形细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.04比0.54±0.02, t=12.357, P<0.01);球形细胞中对照组的CD44蛋白表达水平高于敲低组(0.81±0.09比0.57±0.06, t=7.841, P<0.05)。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析和基因本体论(GO)注释提示GOLPH3的致癌作用与整合素通路激活有关。GOLPH3敲低后整合素(ITG)/局部黏着斑激酶(FAK)通路活性下降, 单层细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.70±0.07比0.42±0.09, t=30.404, P<0.01);单层细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.68±0.10比0.42±0.04, t=6.735, P<0.05);单层细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.61±0.04比0.39±0.04, t=22.084, P<0.01);球形细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.82±0.08比0.56±0.05, t=13.485, P<0.01);球形细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.06比0.64±0.03, t=6.672, P<0.05);球形细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.77±0.11比0.51±0.08, t=9.019, P<0.05)。结论 GOLPH3在肝内胆管癌中高表达, 其致癌机制可能与整合素通路激活有关。

• 出版日期2023
• 单位广东医科大学附属医院; 广东医科大学