禽呼肠孤病毒变异株σC蛋白的原核表达及其抗体ELISA检测方法的建立

作者：武子华; 牛世奇; 马天馨; 王晨阳; 潘晟辉; 苑纯秀; 滕巧泱; 李泽君; 刘芹防^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-11.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230719.001

• ARV变异株
• σC蛋白
• 原核表达
• ELISA

为建立禽呼肠孤病毒（ARV）变异株σC蛋白的抗体间接ELISA检测方法，本研究通过RT-PCR扩增了ARV变异株G4的σC蛋白基因，将其构建至原核表达pET28a(+)载体，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE、Western Blotting验证。结果显示，大肠杆菌BL21能够可溶性表达G4-σC蛋白，通过切胶回收对诱导表达的σC蛋白进行纯化，回收的σC蛋白纯净且具有良好抗原性，将其作为包被抗原建立了变异ARV血清抗体的间接ELISA检测方法。检测结果表明，蛋白包被浓度7.81 ng/mL，最佳包被条件 37℃孵育2 h后4℃过夜；血清1600倍稀释最佳反应时间1.5 h；酶标二抗最佳稀释度1：2000，最佳反应时间1 h；阴阳性临界值为0.487；批内变异系数1.52%-6.75%，批间变异系数8.13%-9.50%，说明包被的ELISA板稳定且可重复；血清稀释6400倍检测为阳性，敏感性良好，并且经检测该方法具有良好的特异性和实用性，与试剂盒阳性符合率达91.07%。成功建立的ARV变异株ELISA检测方法为变异ARV的疾病诊断及疫苗研发提供了工具与支持。

• 出版日期2023
• 单位中国农业科学院上海兽医研究所