CRISPR-Cas13a结合重组酶介导的扩增快速检测副溶血性弧菌方法的建立

作者：葛以跃; 苏璇; 张倩; 陈银; 赵康辰; 吴斌; 吴涛; 朱小娟; 唐震; 朱凤才; 崔仑标^*

来源：现代预防医学, 2019, 46(20): 3777-3781.

• 重组酶介导的扩增
• CRISPR-Cas13a
• 副溶血性弧菌
• 快速检测

目的将重组酶介导的扩增(RAA)技术与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR-Cas13a)检测系统相结合,建立一种快速、灵敏、特异的副溶血性弧菌检测方法(RAA-Cas13a)。方法样本DNA经RAA扩增后,产物采用CRISPR-Cas13a检测系统进行检测,比较CRISPR-Cas13a与琼脂糖凝胶电泳对RAA产物的检测敏感性。对方法进行灵敏度与特异度测试,通过临床样本检测比较建立的方法与real-time PCR法的一致性。结果CRISPR-Cas13a对RAA产物的检测敏感性高于琼脂糖凝胶电泳法;建立的RAA-Cas13a方法检测副溶血性弧菌的灵敏度为10拷贝DNA分子/反应,与其他病原体之间无交叉反应,与real-time PCR对临床样本的检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05),二者的检测一致性较高(kappa=0.934)。结论建立的RAA-Cas13a方法具有快速简单、灵敏特异等优点,为副溶血性弧菌的快速检测提供了新的工具。

• 出版日期2019
• 单位南开大学; 江苏省疾病预防控制中心; 天津国际生物医药联合研究院