H5N1亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达

作者：王盛; 谢芝勋; 罗思思; 谢志勤; 张民秀; 谢丽基; 黄莉; 黄娇玲; 曾婷婷; 范晴; 邓显文

来源：中国兽医科学, 2017, 47(10): 1281-1286.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.10.013

• H5N1亚型禽流感病毒
• HA抗原表位
• sf 9昆虫细胞
• 杆状病毒

本研究选用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建含有H5N1亚型禽流感病毒HA主要抗原基因的重组杆状病毒,并感染sf9昆虫细胞表达HA抗原蛋白。首先,分析禽流感病毒H5N1亚型HA基因编码的氨基酸序列,选取抗原表位集中特异性保守的HA序列,构建重组供体质粒p Fast HA,转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR检测,获得重组穿梭载体Bacmind HA。脂质体法转化对数生长期的sf 9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac HA。经Western-blotting检测及间接免疫荧光(IFA)分析,结果表明,HA蛋白在sf9昆虫细胞中正确表达,分子质量约为45 ku,并具有良好的反应原性。为进一步研制H5N1亚单位疫苗的研发及研制H5亚型ELISA抗体试剂盒奠定了基础。

• 出版日期2017
• 单位广西壮族自治区兽医研究所