黑曲霉木聚糖酶基因(xynB)的克隆及真核分泌表达

作者：张茂; 周庆丰; 杜云平; 刘德武; 孟繁明; 周美华; 吴珍芳

来源：农业生物技术学报, 2010, (02): 368-373.

• 黑曲霉
• 木聚糖酶
• 分泌表达

通过RT-PCR方法,以黑曲霉(Aspergillus niger)GIM3.452总RNA为模板,克隆出木聚糖酶B(xy-lanaseB,xynB)基因的成熟肽编码序列(567bp),编码188个氨基酸。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段PSxynB,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSxynB,重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且构建正确。在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-PSxynB转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测到了木聚糖酶活最高达36.4IU/mL。

• 出版日期2010
• 单位华南农业大学