可溶态和膜结合态双孢蘑菇多酚氧化酶的分离纯化及酶特性分析

作者：何兴兴; 雷静; 关文强

来源：食品科学, 2022, 1-14.

• 双孢蘑菇
• 可溶态多酚氧化酶
• 膜结合态多酚氧化酶
• 分离纯化

为开发一种双孢蘑菇两种不同形态多酚氧化酶的提取纯化方法，本文通过温度诱导相分配、分步硫酸铵沉淀盐析，DEAE-Cellulose-52 阴离子交换层析，对双孢蘑菇中的可溶态（soluble-polyphenol oxidase， sPPO）和膜结合态（membrance-polyphenol oxidase， mPPO）多酚氧化酶进行分离纯化，并通过SDS-PAGE和Native-PAGE凝胶电泳及米氏方程对纯化后两种形态PPO的纯度、分子量及酶促反应动力学进行了初步探究。双孢菇sPPO和mPPO经纯化后对邻苯二酚的比活力分别达到6912.88 U/ mg和19092.94 U/mg，相比于粗酶液，酶的比活力分别提高了12.20和10.87倍，且纯化后mPPO的比活力显著高于sPPO。酶促反应动力学结果显示，sPPO和mPPO 对不同底物的催化活性差异较大，对底物邻苯二酚的催化活性较高，且mPPO比sPPO对底物邻苯二酚的亲和力更强，酶促反应速度更高。sPPO和mPPO对邻苯二酚的最适反应温度均为30℃，最适pH值均为6.8。本研究为双孢菇两种状态多酚氧化酶的质谱鉴定、酶学特性以及抑制酶促褐变的发生等研究奠定了基础。

• 出版日期2022-7-29
• 单位天津商业大学