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摘要
目的探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默高迁移率蛋白1(HMGB1)基因对过敏性紫癜(HSP)患儿血清免疫球蛋白A1(IgA1)诱导的血管内皮细胞凋亡、通透性的影响及机制。方法常规培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默HMGB1基因小干扰RNA(si-HMGB1)及其阴性对照序列(si-NC)转染入HUVEC,用实时荧光定量PCR法检测转染效率;用固定化Jacalin层析柱分离18例HSP患儿及20例体检健康儿童血清IgA1。取转染后的HUVEC随机分组,si-NC+serum组、si-HMGB1+serum组、si-NC+HSP组和si-HMGB1+HSP组。用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-8,用流式细胞术测算HUVEC凋亡率,用细胞膜通透性实验检测单层HU-VEC细胞膜通透系数,用Western blotting法检测HUVEC中p65-NF-κB、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果与siNC+serum组相比,si-NC+HSP组、si-HMGB1+HSP组细胞上清液TNF-α、IL-8水平、细胞凋亡率、内皮细胞通透性及p65-NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量高,Bcl-2蛋白相对表达量低(P均<0.05);si-NC+serum组与si-HMGB1+serum组上述指标比较差异无统计学意义(P均>0.05)。与si-NC+HSP组相比,si-HMGB1+HSP组细胞上清液TNF-α、IL-8水平、细胞凋亡率、内皮细胞通透性及p65-NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量低,Bcl-2蛋白相对表达量高(P均<0.05)。结论沉默HMGB1基因可抑制HSP患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞凋亡,降低其通透性;其作用机制可能与NF-κB通路有关。
