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摘要
本研究以杉木茎段为材料,对RNA提取、反转录方法、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析,探讨了影响杉木茎段cDNA-AFLP分析体系的各种因素,建立并优化了杉木茎段cDNA-AFLP反应体系。结果表明:采用Chang等(1993)的CTAB-LiCl法稍加改进后提取RNA,得到的杉木茎段总RNA样品较为完整,纯度较高;Primescript反转录酶结合置换合成法得到的cDNA模板质量较高,可以满足cDNA-AFLP对于cDNA的要求。约300ngcDNA分别经限制性内切酶EcoRⅠ,37℃,2h以及MseⅠ,65℃,5h完全酶切,MBIT4连接酶5U,22℃,...
- 出版日期2010-3-28
- 单位南京林业大学
