CRISPR/Cas9介导RSAD2基因敲除的ST细胞模型建立

作者：李娟; 杜柳阳; 顾金燕; 曹瑞兵^*

来源：中国细胞生物学学报, 2022, 44(06): 1069-1076.

• RSAD2
• CRISPR/Cas9系统
• 基因敲除

RSAD2是一种多功能干扰素(interferon,IFN)诱导蛋白。该研究利用CRISPR/Cas9系统建立了RSAD2基因敲除的猪睾丸细胞系(swine testicular cell,ST cell)模型。应用在线工具设计了针对RSAD2基因的4条sgRNA,并将其克隆至pX459载体。经嘌呤霉素初步筛选、Western blot检测确定了RSAD2-sgRNA-4具有最优敲除效果。该实验通过单克隆化转染RSAD2-sgRNA-4的ST细胞后成功获得RSAD2基因敲除ST细胞模型。双荧光素酶活性实验及实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)证明，RSAD2基因敲除对ST细胞的IFN-β、IRF3、NF-κB基因启动子活性及mRNA水平没有明显影响。该实验利用CRISPR/Cas9系统构建并获得稳定敲除RSAD2基因的ST细胞模型,为RSAD2功能研究提供有力工具。

• 出版日期2022
• 单位浙江大学