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摘要
以蓝藻高效降解菌云芝F21a(Trametes versicolor)为出发菌株,对其原生质体的制备、再生条件及限制性内切酶介导的遗传转化进行研究。结果表明:在PDA培养基上,28℃培养4 d的菌丝最适于原生质体制备;0.6 mol/L KCl为最适等渗条件;30℃混合酶液(2%cellulase+2%snailase+2%lywallzyme)酶解4 h,原生质体产量达到2.375×107个/m L,此时再生率达0.74%。采用限制性内切酶介导技术可将质粒p AN7-1导入云芝F21a的原生质体,在含有150μg/m L潮霉素的RM培养基中能够获得再生菌株,PCR验证初步表明该质粒已经转入云芝F21a原生质体。连续传代转接显示,阳性转基因菌株外源基因可以稳定表达,本结果为研究真菌高效消除蓝藻的分子机制奠定基础。
- 出版日期2015
- 单位安徽农业大学; 生命科学学院
