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摘要
【目的】抵抗素(resistin,RETN)在机体脂糖代谢和促炎过程中都发挥着重要作用。获得有活性、高效表达的可溶性牛抵抗素并鉴定其正确性,以期为后续其相关疾病的研究和防治奠定基础。【方法】以肉牛大网膜脂肪组织为原料提取总RNA,经RT-PCR获得目的基因,克隆至原核表达载体PET-21a中,构建重组表达质粒PET-Resistin。经双酶切及测序鉴定正确后,对宿主菌、IPTG浓度、诱导温度及时间进行优化,用抗His抗体鉴定融合蛋白表达正确。【结果】在宿主菌Rosetta,IPTG终浓度1.0 mmol/L,20℃诱导14 h时,牛抵抗素的表达量最高;在上述条件下,牛抵抗素存在于上清液中,为可溶性表达。【结论】成功克隆表达出仅含His标签的可溶性牛抵抗素,为进一步研究牛抵抗素参与相关疾病的调控途径和防治奠定了基础。
- 出版日期2018
- 单位四川农业大学
