蛋白激酶D1催化结构域在昆虫细胞/杆状病毒表达系统内的表达、纯化和活性测定

作者：李志红; QimingJaneWang

来源：生物工程学报, 2014, (08): 1291-1298.

DOI：10.13345/j.cjb.130517

• 蛋白激酶D
• 催化结构域
• 昆虫细胞
• 杆状病毒表达系统
• 表达
• 纯化 protein kinase D
• catalytic domain
• insect cell
• baculovirus expression system
• protein expression
• purification

蛋白激酶D(Protein kinase D,PKD)是一种新的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族和甘油二酯(Diacylglycerol,DAG)受体,参与细胞内多种生理生化过程。为获得高纯度的PKD1的催化结构域(PKD1-cat)用于晶体学结构的研究,将带有GST标签的PKD1-cat基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中,构建了重组质粒。将重组质粒转化到含穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,转座后获得了含目的基因GST-PKD1-cat的重组Bacmid。重组Bacmid DNA转染Sf9昆虫细胞后,获得重组杆状病毒并扩毒。将毒种以5 PFU/cell的感染复数感染悬浮培...

• 出版日期2014
• 单位三峡大学