大鼠STAT3特异性shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

作者：张五星; 周伟; 赵学伟; 丁晓然; 周喆; 张智敏; 周焕芝; 石炳毅

来源：四川医学, 2012, (02): 195-198.

DOI：10.16252/j.cnki.issn1004-0501-2012.02.059

• 信号转导子及转录激活子3(STAT3)
• 短发夹RNA(shRNA)
• 慢病毒载体
• RNA干扰(RNAi) signal transducers and activators of transcription 3(STAT3)
• short hairpin RNA(shRNA)
• lentivirus vector
• RNA interference(RNAi)

目的在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果最佳者进行慢病毒包装并鉴定。方法将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量。对于筛选所得干扰效果最佳的质粒,采用pPACKH1TM慢病毒载体系统进行病毒包装。利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测。结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果最佳。成功构建了慢病毒...

• 出版日期2012
• 单位军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 中国人民解放军第三〇九医院