基于易错PCR的头孢菌素C酰化酶的定向进化

作者：王颖秋; 郑林冲; 谢丽萍; 朱宝泉; 胡又佳

来源：中国医药工业杂志, 2013, (04): 344-347.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2013.04.023

• 头孢菌素C酰化酶
• 易错PCR
• 体外进化
• 头孢菌素C
• 7-氨基头孢烷酸 cephalosporin C acylase
• error-prone PCR
• in vitro evolution
• CPC
• 7-ACA

以前期工作中获得的一个可以直接转化头孢菌素C(CPC)为7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的CPC酰化酶为基础,采用易错PCR,引入不同浓度的Mg2+和Mn2+,所得易错PCR产物经克隆、转化后进行初筛,共筛选了400株转化子,其中有35株酶活力得到提高。采用金属螯合亲和色谱法分离得到纯酶后再进行复筛,其中一株酶活力显著提高,转化率提高约35%。测序结果显示,该CPC酰化酶突变蛋白的编码序列中有两个碱基发生突变,使得第122位的丙氨酸被替换为缬氨酸。在最适条件下,该酶催化CPC生成7-ACA的转化率为95%。

• 出版日期2013
• 单位上海医药工业研究院; 中国医药工业研究总院