偶联酰胺化衍生-液相色谱法高灵敏度检测土壤圈样品中小分子单羧酸

作者：陈虹; 唐昊冶; 钟明; 刘晓东; 王如海; 俞元春

来源：土壤学报, 2021, 1-13.

• 小分子单羧酸
• 偶联
• 酰胺化
• 液相色谱检测

甲、乙、丙、丁酸在土壤圈广泛存在，通常含量较低，测定时易受基质中杂质干扰，难以准确定性定量。采用偶联酰胺化法将具有紫外高灵敏响应的吲哚基团引入其结构中，生成酰胺类衍生物，即可在液相色谱-二极管阵列/紫外检测器（HPLC-DAD/UV）下间接高灵敏度检测，达到准确测定的目的。衍生化操作步骤如下：先将适量样品和2-（N-吗啉代）乙磺酸（MES）水溶液加入反应小瓶中，使反应体系pH保持约5.5，再加入适量的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）水溶液，交联反应20 min后再加入适量的N-羟基丁二酰亚胺（NHS）水溶液，之后经偶联反应适当时间后再加入色胺的乙腈水溶液，酰胺化反应过夜，第二天用超纯水定容终止反应，待测。实验表明：在衍生化过程中，当保持MES:EDC:NHS:色胺:羧基≈10:7:3:7:1（摩尔比）的比例，加入NHS后偶联反应45 min时效果较佳。该方法中四种有机酸的检测限范围为0.008～0.046 mg·L-1，标准工作曲线的线性决定系数R2为0.991～0.998，平均回收率为85.9%～123%，方法精密度为1.69%～8.41%，可以满足有机分析要求。与液相色谱法直接测定小分子单羧酸相比，发现直接法测试结果与衍生-液相色谱法测试结果基本一致，但衍生法可以修正直接法中杂质干扰带来的阳性误差，同时提升低浓度单羧酸样品中有机酸的检出率，定性与定量结果更可靠。

• 单位
  南方现代林业协同创新中心; 中国科学院南京土壤研究所; 南京林业大学