青光安Ⅱ号方有效组分对慢性高眼压DBA/2J小鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

作者：曾志成; 李银鑫; 秦惠钰; 蒋鹏飞; 彭俊^*; 彭清华^*

来源：湖南中医药大学学报, 2022, 42(12): 1973-1981.

• 青光安Ⅱ号方
• 青光眼
• DBA/2J小鼠
• Wnt/β-Catenin/Pax6信号通路
• 细胞凋亡

目的 观察青光安Ⅱ号方及其低、中、高浓度有效组分对青光眼模型小鼠视网膜神经节细胞的保护作用机制。方法 将8只雌性C57BL/6小鼠设为正常对照组（A组）并灌胃蒸馏水，48只38周龄雌性DBA/2J小鼠随机分成6组：模型组（B组）、益脉康分散片组（C组）、青光安Ⅱ号汤剂组（D组）、青光安Ⅱ号有效组分低浓度组（E组）、青光安Ⅱ号有效组分中浓度组（F组）、青光安Ⅱ号有效组分高浓度组(G组），分别灌胃蒸馏水、益脉康分散片混悬液、青光安Ⅱ号方汤剂、青光安Ⅱ号方有效组分低/中/高浓度汤剂。干预4周后，HE染色观察小鼠视网膜组织结构，TUNEL染色观察视网膜神经节细胞凋亡，免疫组化染色观察视网膜组织神经节细胞层糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)、β-连环蛋白（β-Catenin）及同源盒基因-6(paired box gene-6, Pax6)表达情况，Western blot法测定视网膜组织GSK-3β、β-Catenin及Pax6蛋白相对表达量。结果 眼压测量发现，DBA/2J小鼠眼压在26周及以后明显上升，从第14周开始DBA/2J小鼠眼压明显高于C57BL/6J组（P<0.05或P<0.01）;A组小鼠视网膜各层组织结构清晰、完整、染色均匀、清晰可见3个核层，神经节细胞呈单层排列，比较连续无间断，细胞呈圆形或椭圆形；B组小鼠视网膜以神经节细胞层（ganglion cell layer, GCL）损伤最为明显，神经节细胞明显减少，连续性中断，胞内空泡样变性，核固缩；C组、D组、E组、F组、G组神经节细胞数目增多，胞内空泡样变性改变均有所改善。与A组比较，B组凋亡指数明显升高（P<0.01）；与B组比较，C组、D组、E组、F组、G组凋亡指数均明显降低（P<0.01）；与C组、D组比较，E组凋亡指数升高（P<0.05）。与A组比较，B组视网膜GSK-3β表达量明显升高（P<0.01）,β-Catenin和Pax6表达量明显降低（P<0.01）；与B组比较，C组、D组、E组、F组、G组GSK-3β表达量均明显降低（P<0.01）,C组、D组、G组β-Catenin表达量均有升高（P<0.05或P<0.01）,C组、D组、F组、G组Pax6表达量均有升高（P<0.05或P<0.01）；与C组和D组比较，G组GSK-3β表达量降低（P<0.05）,β-Catenin和Pax6表达量升高（P<0.01）。Western blot检测发现B组视网膜GSK-3β蛋白表达量明显升高（P<0.01）,β-Catenin和Pax6蛋白表达量明显降低（P<0.01）；与B组比较，C组、D组、E组、F组、G组GSK-3β蛋白表达量均明显降低（P<0.01）,C组、D组、G组β-Catenin和Pax6蛋白表达量均有升高（P<0.05）；与C组、D组比较，G组GSK-3β表达量降低（P<0.05）,β-Catenin和Pax6表达量升高（P<0.01）。结论 高浓度青光安Ⅱ号方有效组分能明显改善青光眼视网膜结构，抑制RGCs凋亡，抑制GSK-3β蛋白和促进β-Catenin、Pax6蛋白在视网膜中的表达，其作用可能与激活Wnt/β-Catenin/Pax6信号通路有关。

• 出版日期2022
• 单位湖南中医药大学第一附属医院; 湖南中医药大学; 桂阳县第一人民医院