Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体

作者：陈鑫; 李卫滨; 王开宇; 兰小鹏

来源：临床检验杂志, 2012, 30(07): 518-521.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2012.07.022

• 以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化技术
• 适配体
• 急性早幼粒细胞白血病
• NB4细胞

目的用以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(Cell-SELEX)技术获得与急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4高亲和力、高特异性的适配体。方法以NB4细胞为靶标,用Cell-SELEX技术从随机单链DNA(ssDNA)文库中筛选出一组适配体,将筛选得到的适配体群进行克隆、测序及结合力测定,用流式细胞仪和荧光显微镜对结合率最高的适配体进行亲和力和特异性分析。结果第1,4,7,10,13,16,19轮筛选获得的次级文库与NB4细胞的结合率分别为(1.6%,3.8%,6.3%,11.4%,15.4%,19.9%,16.7%);第16轮筛选的21个阳性克隆菌测序结果表明,存在有3种高度富集的适配体,分别为CX1序列2个,CX5序列3个,CX9序列16个;流式细胞仪检测3种序列的结合率分别为9.7%,12.6%,17.2%;CX9的解离常数(Kd)为16.2 nmol/L;荧光显微镜下发现,CX9与NB4细胞结合的荧光强度高于K562细胞。结论用Cell-SELEX技术成功筛选到针对NB4细胞的适配体CX9,为荧光标记适配体快速鉴定APL提供实验依据。

• 出版日期2012
• 单位解放军第94医院; 中国人民解放军第二军医大学; 南京军区福州总医院