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摘要
为挖掘家禽血液潜在的抗氧化特性,以鸡血球为原料,筛选最佳蛋白酶酶解制备抗氧化肽,并对酶解工艺进行响应面优化。采用超滤、阳离子交换色谱、凝胶色谱及高效液相色谱对酶解物进行连续分离纯化,并用质谱进行结构鉴定。结果表明,酸性蛋白酶水解血球蛋白制备的酶解物具有最高的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力(>80%)。其最佳酶解条件为酶用量2%、酶解温度45℃、酶解时间3.0 h,该条件下的DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和还原力分别为(98.31±0.66)%、(28.89±0.31)%和1.94±0.03。经系列分离纯化获得抗氧化活性最强的组分,其在质量浓度为0.1 mg/mL时,DPPH自由基清除能力和还原力分别为(87.16±1.59)%和0.21±0.01。经高效液相色谱-质谱联用技术鉴定,目标肽的氨基酸序列为MGQKDSYVGDEAQSKRGILT,分子质量为2 182.1 Da。
