猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

作者：杨达汉; 邓守全; 王哲; 王丰; 薛江东; 刘锴; 霍晓伟; 马德慧

来源：中国兽医学报, 2017, 37(04): 632-642.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2017.04.09

• 猪肺泡巨噬细胞
• PRRSV
• SMART技术
• 酵母双杂交cDNA文库
• 同源重组

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库。首先提取PAM总RNA,使用SMART RACE法经LD PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,通过同源重组的方法将双链cDNA与pGADT7-Rec质粒共转化进酵母Y187感受态,再利用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选阳性克隆,最终构建的文库滴度达到了6.96×107 CFU/mL,重组率初步计算达到95%,插入片段范围在2002 000bp。本研究为PRRSV致病蛋白的筛选以及相关疾病的研究奠定了基础。

• 出版日期2017
• 单位内蒙古民族大学