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摘要
目的:拟采用一套新的基因免疫系统制备高特异性和高效价的小鼠抗有机阴离子转运蛋白4(hOAT4 )多克隆抗体,并用该抗体对hOAT4在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法:应用Accelrys软件分析hOAT4抗原表位,选择其中免疫源性较强的细胞内表位(E2 78～R345 ) ,从人肾组织总RNA中用反转录-聚合酶链反应(RT -PCR)方法扩增其2 0 4bp的cDNA序列,克隆到pBQAP -OVA构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi -FlT3L同时免疫小鼠,5周后取血清抗体,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果:成功构建基因免疫载体pBQAP -OVA -hOAT4 ,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA方法测得抗体滴度高达1∶30 0 0 ,该抗体识别人肾皮质膜蛋白和肾小管刷状缘蛋白6 5kD糖基化的hOAT4。人肾组织免疫组化结果提示该抗体识别定位在近段肾小管上皮细胞刷状缘的hOAT4。结论:用基因免疫方法可以成功制备高效价和高特异性抗hOAT4多克隆抗体。
- 出版日期2005
- 单位中国人民解放军总医院
