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摘要
目的:构建新型曲妥珠纳米生物探针,探讨其对乳腺癌细胞抑制影响的体外实验。方法:以柠檬酸盐还原法制备金纳米颗粒(gold nanoparticles,GNPs),通过静电作用吸附曲妥珠单抗(Herceptin),进而合成曲妥珠金纳米探针(GNP@Herceptin);免疫组化检测MCF-7与SK-BR-3细胞HER-2蛋白表达;GNPs增殖抑制检测设12.5、25.0、50.0、100.0、200.0和400.0μg/mL 6个浓度,并设置空白细胞组(0mg/mL),试剂盒检测GNPs细胞毒性;综合细胞增殖抑制检测设GNPs、Herceptin和GNP@Herceptin组,每组设6.25、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0ng/mL 6个浓度,并设置空白细胞组(0ng/mL),试剂盒检测MCF-7与SK-BR-3细胞增殖抑制效果;设0.25、0.5和1.0μg/mL 3个浓度的Herceptin、GNP@Herceptin,并设置空白细胞组(0μg/mL),试剂盒检测SK-BR-3细胞凋亡与周期阻滞;利用方差分析与独立样本t检验处理相应实验数据。结果:金纳米颗粒近似圆形,粒径大小(14.11±1.134)nm,与曲妥珠单抗吸附后,溶液澄清透亮,GNPs与Herceptin结合率为2.25∶1;GNPs浓度在400μg/mL时,MCF-7细胞存活率减少至43.9%(t=39.709,P=0.001),在100μg/mL时,SK-BR-3细胞存活率为65.1%(t=6.796,P=0.002),均有明显细胞毒性效果,但金纳米颗粒浓度下降至50μg/mL时,SK-BR-3与MCF-7细胞生存率分别为82.8%(t=1.979,P=0.119)、99.3%(t=0.177,P=0.868),且未显示出细胞增殖抑制效果,低浓度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin处理SK-BR-3细胞后,最佳用药剂量为每10 000个细胞7.143ng,GNP@Herceptin处理细胞后最佳用药量从50ng/mL降低至25ng/mL,差异有统计学意义,t=14.774,P<0.001;GNP@Herceptin最高浓度处理细胞时,细胞凋亡率从9.37%增大至16.87%,差异有统计学意义,t=6.537,P=0.001;G1期阻滞从74.70%增大到83.12%,差异有统计意义,t=5.286,P=0.006;G2/M期细胞数从14.14%减少至6.22%,差异有统计学意义,t=6.732,P=0.003。结论:构建的曲妥珠金纳米探针GNP@Herceptin性状稳定,可大比例降低Herceptin用药剂量,对HER-2过表达乳腺癌治疗具有实用研发前景。
