棉花去泛素化酶基因GhOTUD5原核表达条件的优化

作者：兰艳平; 刘东; 赵岩; 张丽; 陈义; 冯加加; 渠云芳^*; 黄晋玲^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(10): 3223-3231.

DOI：10.13271/j.mpb.018.003223

• 棉花
• GhOTUD5基因
• 原核表达
• 正交试验
• 条件优化

棉花组蛋白去泛素化酶GhOTUD5与生殖发育密切相关。为了获得大量可溶性表达的GhOTUD5蛋白,本试验对目的蛋白原核表达条件进行优化。采用分子克隆方法构建重组表达载体pET-22b-GhOTUD5,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)和Transetta (DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导目的蛋白表达。在对影响原核表达的四个单因素(菌体密度OD600,诱导剂IPTG终浓度,诱导时间和诱导温度)分别分析的基础上,设计三水平的正交试验L9(43),摸索大量可溶性目的蛋白表达的最优条件。结果显示,目的蛋白GhOTUD5在Transetta (DE3)中成功表达,在BL21 (DE3)中不表达。在菌体密度OD600为0.8、诱导温度为28℃、IPTG终浓度为0.7 mmol/L、诱导3 h的条件下可溶性目的蛋白表达量最高,达到13%左右。该研究结果为进一步研究GhOTUD5在棉花育性方面的功能提供了科学数据。

• 出版日期2020
• 单位山西农业大学