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摘要
目的建立一种简单、快速、成活率和纯度高的原代培养方法,以获得大量成骨细胞,并对成骨细胞生物学活性进行研究。方法无菌取5日龄SD大鼠的颅盖骨,采用改良的二次酶消化法分离成骨细胞,通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布;培养的成骨细胞单独应用BMP-2和BMP-7以及联合应用BMP-2和BMP-7作用48 h后,用MTT法检测成骨细胞增殖,同时测定成骨细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量。结果较为快速获得大量成骨细胞,成骨细胞培养至第10天时活性最强。单独应用BMP-2和BMP-7,联合应用BMP-2和BMP-7作用48 h后,均能刺激大鼠乳鼠成骨细胞的增殖,增加成骨细胞ALP活性和OCN含量,但单独应用BMP-2和BMP-7组与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。联合应用BMP-2和BMP-7作用后,与对照组、单独应用BMP-2和BMP-7组比较,能明显增强成骨细胞生物学活性,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞。联合应用BMP-2和BMP-7能使成骨细胞生物学活性得到显著增强。
- 出版日期2014
- 单位大连市第二人民医院; 大连医科大学
