敲低、过表达NCOA4慢病毒包装及稳转HFL1细胞株构建

作者：黄德林; 陈雅慧; 凡志婷; 石祥广; 黄炎; 王少辉; 王久存; 姜帅^*

来源：生物化工, 2022, 8(04): 1-5.

DOI：10.3969/j.issn.2096-0387.2022.04.001

• NCOA4
• HFL1
• 慢病毒载体
• 铁死亡
• 肺部疾病

目的：构建敲低、过表达人NCOA4基因的慢病毒载体，建立敲低、过表达NCOA4的HFL1稳转株，为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用提供一个细胞模型。方法：设计NCOA4的shRNA并插入pLKO.1载体；获取人NCOA4全基因组序列并插入pCDH载体。DNA测序验证载体目的基因序列。慢病毒包装载体共转染293T细胞，包装病毒并感染HFL1，使用Western Blot、qPCR检测其敲低、过表达效果。结果：本研究成功构建了NCOA4敲低、过表达慢病毒载体。慢病毒感染人HFL1细胞后，得到敲低、过表达NCOA4基因的HFL1稳转株。结论：成功获取了稳定敲低、过表达NCOA4的HFL1的细胞株，为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用和机制奠定了基础。

• 出版日期2022
• 单位生命科学学院; 复旦大学