马尔他布氏杆菌KdtA基因的克隆及原核表达

作者：彭冬梅; 李国华; 李亚颖; 贾晓晓; 徐开莲; 朱华培; 赵天靖; 庞峰; 王凤阳; 杜丽

来源：中国兽医科学, 2015, 45(09): 969-972.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2015.09.015

• 马尔他布氏杆菌
• KdtA基因
• 克隆
• 原核表达

为了研究马尔他布氏杆菌KdtA蛋白的功能,根据GenBank中公布的马尔他布氏杆菌M5-90株KdtA基因序列,利用DNAMAN软件设计上、下游引物,以M5-90株的基因组DNA为模板,采用PCR对其进行扩增,凝胶回收纯化后得到1 341bp的目的片段;然后构建克隆重组质粒pMD20-T-KdtA,将其转化到大肠杆菌DH5α;待测序正确后,构建原核表达质粒pET-28a(+)-KdtA,再将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对基因的表达情况进行分析检测。结果表明,成功克隆了KdtA基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了KdtA基因;经诱导后得到了预期的目的蛋白,证明KdtA基因得到了成功表达。

• 出版日期2015
• 单位海南大学