耐高温耐酸稳定假密环菌(Armillariella tabescens)MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化

作者：吴秀秀; 吕晓慧; 胡亚冬; 谢春芳; 刘大岭; 姚冬生

来源：中国生物工程杂志, 2012, (03): 83-90.

DOI：10.13523/j.cb.20120314

• 定向进化
• β-甘露聚糖酶
• DNA shuffling
• 耐酸高温稳定
• 结构分析 Directed evolution β-mannanase DNA shuffling Acid tolerence thermalstablility Structure analysis

从已经建立的易错PCR初级突变文库中筛选得到的16个兼具耐酸、高温稳定、高酶活力的克隆出发,将其作为DNA shuffling的亲本基因,利用DNA shuffling技术,结合易化筛选和96微孔板通量筛选的方法获得耐酸、高温稳定的克隆。并且,对筛选出来的耐酸高温稳定的突变子进行测序分析和同源建模,比较分析β-甘露聚糖酶突变基因序列的生物学信息。经过两轮DNAshuffling,最终筛选得到一个耐酸高温稳定突变体1108,其在90℃时酶活力还能维持在70%;在pH 3.0时酶活力维持在70%;在高温80℃和pH 4.0的条件下,酶活力是野生型的10倍;常规条件下(pH 6.0,40℃),酶活力...

• 出版日期2012
• 单位暨南大学