禽流感病毒(H9亚型)重组CHO细胞258株的构建及鉴定

作者：宋扬; 于镭; 梁宛楠; 李倩

来源：饲料博览, 2021, (10): 20-24.

• 禽流感病毒(H9亚型)258株
• HA-M2e基因
• 真核表

为构建禽流感病毒(AIV)重组CHO细胞株,本研究以AIV(H9亚型)258株为模板,以AIV的HA基因胞外域及3个重复串联的M2蛋白胞外域为靶基因,根据CHO细胞密码子偏爱性对其密码子进行优化,将HAM2e基因插入真核表达载体p CI-GS中,构建了含有HA-M2e基因的重组质粒,并将该重组质粒转染CHO细胞,经加压筛选获得了高效表达HA-M2e蛋白的重组CHO细胞株。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)法对重组CHO细胞株进行鉴定,并用琼扩试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)对表达蛋白进行效价及蛋白含量测定。结果显示,经SDS-PAGE、Western Blot检测,表达蛋白大小约66 ku,与预期大小相符;琼扩效价为1.512,蛋白质含量为1.13 mg·mL-1。表明通过基因工程技术构建的含AIV HA-Mze基因的重组CHO细胞258株可作为疫苗研制用毒株。

• 出版日期2021
• 单位哈药集团生物疫苗有限公司