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摘要
目的 经皮冠状动脉介入治疗冠心病有较好的近期疗效，但患者长期预后却受血管再狭窄的制约，血管平滑肌细胞(VSMC)的表型转化是导致血管狭窄的主要原因。文章通过构建敲低Tudor-SN稳定株，检测Tudor-SN基因对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖、迁移、凋亡的影响，为研究血管平滑肌细胞表型转化和血管再狭窄发病机制提供细胞模型。方法 通过制备敲低Tudor-SN基因的重组慢病毒，感染A7R5细胞，加入嘌呤霉素药物筛选出低表达Tudor-SN基因的稳定株；使用Western blot检测Tudor-SN敲低效果；在表型实验中，将A7R5细胞分为pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组，利用CCK-8实验、免疫荧光实验、细胞划痕实验和流式细胞术分别检测对照组和实验组A7R5细胞的增殖、迁移和凋亡的变化；使用PDGF诱导pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组细胞表型转化，检测Tudor-SN蛋白表达。结果 成功构建了敲低Tudor-SN的shRNAs的重组慢病毒稳定株；表型实验结果显示，敲低Tudor-SN后，实验组从第3天起细胞增殖能力明显低于对照组，实验组迁移面积(1.6、1.7μm2)与对照组(2.7μm2)相比明显下降(P<0.05),细胞凋亡能力增加(P<0.05);给予PDGF刺激，Tudor-SN蛋白表达增加(P<0.05);与对照组相比，实验组Tudor-SN蛋白表达有所增加(P<0.05)。结论 敲低Tudor-SN血管平滑肌细胞增殖及迁移能力降低，凋亡水平增加，并且敲低Tudor-SN降低了PDGF诱导的VSMC表型转化，表明Tudor-SN蛋白参与并促进了VSMC表型转化。
