定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F-10酶活性

作者：唐自钟; 刘默洋; 李雨霏; 孙蓉; 刘姗; 陈惠; 韩学易

来源：食品与生物技术学报, 2014, (08): 870-876.

• 内切葡聚糖酶
• 定点突变
• 分离纯化
• 热稳定性
• 酶学性质
• 结构分析 endoglucanase
• site-directed mutagenesis
• separation and purification
• thermostability
• enzymatic properties
• structure analysis

利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R。经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析。结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66...

• 出版日期2014
• 单位四川农业大学