蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响

作者：张晓静; 丛斌; 刘威; 李淑瑾; 马春玲; 倪志宇; 付丽红; 张国忠; 左敏

来源：中国病理生理杂志, 2008, (05): 896-900.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2008.05.013

• 蛋白质巯基亚硝基化
• 一氧化氮
• cAMP反应元件结合蛋白
• RSC-364细胞
• 关节炎,类风湿

目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10μg/L孵育RSC-364细胞1h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(elec-trophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P<0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P<0.01)。结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性。

• 出版日期2008
• 单位河北医科大学; 河北省胸科医院