柯萨奇病毒A2病毒样颗粒的制备、纯化及鉴定

作者：禹玉婷; 胡岗; 罗志宇; 卢佳; 王泽鋆; 孟胜利; 申硕^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(07): 782-787.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003389

• 柯萨奇病毒A2
• 病毒样颗粒
• Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
• 纯化

目的制备柯萨奇病毒A2(Coxsackievirus A2,CV-A2)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并对其进行纯化及鉴定。方法将CV-A2 P1和3CD基因序列根据昆虫细胞偏好特性进行密码子优化并人工合成,分别克隆至供体质粒pFastBacDual的多角体蛋白启动子(pPh)和pP10启动子后,构建重组质粒pFastBacDualCV-A2 P1-3CD,转化至大肠埃希菌(E. coli)DH10 BacTM中,转座形成重组bacmid,再将重组bacmid转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBacCV-A2 P1-3CD,经蔗糖垫底离心和氯化铯密度梯度离心法纯化rCV-A2 VLPs,SDS-PAGE、Western blot法检测浓度及纯度,透射电镜法观察VLPs颗粒形态。结果质粒pFastBacDualCV-A2 P1-3CD经双酶切鉴定,重组Bacmid、rCV-A2VLPs经PCR鉴定,均在预期目标条带处可见清晰条带;rCV-A2 P1-3CD蛋白经IFA鉴定可见明显荧光;rCV-A2 VLPs经SDS-PAGE及Western blot分析,均可见清晰的VP0(相对分子质量约39 000)、VP1(相对分子质量约34 000)和VP3(相对分子质量约27 000)条带;透射电镜观察纯化r CV-A2 VLPs,可见直径23～33 nm的颗粒,形态和大小与CV-A2一致。结论成功构建了pFastBacDualCV-A2 P1-3CD重组Bacmid质粒,并成功表达了rCV-A2 VLPs,为今后rCV-A2 VLPs疫苗的研发奠定了基础。

• 出版日期2021
• 单位武汉生物制品研究所有限责任公司