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摘要
目的 构建人canstatin克隆载体及重组真核表达载体,观察电脉冲介导骨骼肌内canstatin基因导入对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长的影响.方法 用一步法RT-PCR钓取胚肝canstatin cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建含重组质粒pEGFP-N1/canstatin;将该重组质粒通过电脉冲转入荷瘤Lewis肺癌小鼠肌肉内,应用逆转录PCR、荧光显微镜测量荧光强度、肿瘤称重、肿瘤体积测定及免疫组化的方法检测canstatin基因在体内的表达和抗肿瘤作用.结果 获得684 bp人canstatin基因,测序证明canstatin cDNA编码序列与Genbank中报道的序列一致.电脉冲介导的质粒基因导入效率较单纯质粒注射高30倍以上;转canstatin基因后导入部位的canstatin mRNA高表达,目的蛋白表达时间可持续25 d以上.EGFP/Canstatin融合蛋白在导入部位表达并分泌至循环中发挥生物学效应,起到抑制远隔部位肿瘤生长的作用.实验组肿瘤颜色苍白,毛细血管稀少,坏死多,体积小,瘤重抑制率57.7％.结论 成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N1/canstatin,电脉冲介导的骨骼肌内基因导入法的转移效率较单纯质粒注射高且持续时间长;是一种高效安全,简便经济,可能具有一定临床应用价值的基因导入方法;电脉冲介导骨骼肌内canstatin基因导入对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长具有显著的抑制作用.
