鞘氨醇激酶及1-磷酸鞘氨醇信号参与大鼠肝窦微循环保护

作者：金丽明; 黄东胜; 刘原兴; 周琳; 谢海洋; 冯晓文; 李辉; 沈岩; 徐骁; 郑树森^*

来源：中华实验外科杂志, 2020, 37(10): 1826-1829.

DOI：10.3760/cma.j.cn421213-20191031-00772

• 鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇信号
• 缺血再灌注损伤
• 肝窦内皮细胞

目的探讨鞘氨醇激酶/1-磷酸鞘氨醇(SphK/S1P)信号通路在肝脏缺血再灌注损伤(IRI)中肝窦微循环的保护作用。方法 2015年9月至2019年9月, 将40只适龄雄性大鼠(购自常州卡文斯实验动物有限公司), 信封法随机分4组包括, 假手术(Sham)组, IRI+等体积生理盐水组(IRI组), IRI+SphK激动剂组(PMA组)和IRI+SphK阻断剂组(DMS组)。建立大鼠IRI模型, 通过对SphK/S1P信号激动和阻滞后, 应用苏木精-伊红(HE)和细胞凋亡染色原位缺口末端标记法(TUNEL)技术观察肝窦间隙、肝窦内皮细胞(LSEC)和肝细胞的形态学改变及其细胞凋亡程度, 酶联免疫吸附(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)对细胞间黏附分子(ICAM-1)和髓过氧化物酶(MPO)的表达进行评价。应用SPSS 17.0统计软件行χ2检验和单因素方差分析。结果 HE染色显示SphK激动剂(PMA)可改善缺血肝脏损伤, 减轻肝窦异常扩张, LSEC损伤程度得到改善, 其阻断剂反而加重LSEC的损伤。与Sham组(3.46±0.27)比较, IRI组大鼠血清S1P升高(4.71±0.42, t=4.336, P<0.05);与IRI组比较, PMA组血清S1P显著升高(36.01±10.13, t=5.347, P<0.01), DMS组血清S1P显著降低(15.83±3.14, t=6.080, P<0.05)。与Sham组[(10.09±1.05)%]比较, IRI组肝脏细胞凋亡率显著升高(28.83±2.06)%, t=14.040, P<0.05];与IRI组比较, PMA组肝脏细胞凋亡率显著降低[(13.59±3.02)%, t=7.221, P<0.05], 而DMS组肝细胞凋亡率显著升高[(61.92±7.72)%, t=7.173, P<0.01]。与IRI组比较, PMA组肝脏S1PR的蛋白表达升高(S1PR:1.65±0.12比2.50±0.09, t=9.930, P<0.05), MPO、ICAM-1的蛋白表达降低(ICAM-1:3.21±0.39比1.52±0.26, t=6.245, P<0.05;MPO:2.51±0.20比1.09±0.13, t=10.310, P<0.05);而DMS组肝脏S1PR的蛋白表达降低(S1PR:1.65±0.12比1.31±0.09, t=3.926, P<0.05), MPO、ICAM-1蛋白表达升高(ICAM-1:3.21±0.39 5.92±0.22, t=7.855, P<0.05;MPO:2.51±0.20比5.21±0.43, t=9.861, P<0.05)。结论 SphK/S1P信号通过减少细胞凋亡, 减少MPO和ICAM-1表达, 减少白细胞和LSEC的黏附, 从而改善肝窦微循环。

• 出版日期2020
• 单位浙江大学附属第一医院; 杭州医学院; 省人民医院; 浙江省人民医院