可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

作者：姬玲玲; 毛淑华; 刘洪; 许士叶; 杨雨; 易成; 黄英

来源：生物医学工程学杂志, 2010, 27(02): 369-372.

• 血管内皮生长因子
• 可溶性血管内皮生长因子受体1
• 内皮细胞
• 真核表达
• 抗血管生成

本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导的血管内皮细胞增殖。

• 出版日期2010
• 单位四川大学; 四川大学华西医院; 成都医学院