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摘要
目的:探讨矮壮素（chlorocholine chloride,CCC）对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞骨骼发育相关基因及蛋白表达情况的影响,评价矮壮素对骨骼发育的影响,并探究其可能的作用机制。方法:选取处于对数生长期的MC3T3-E1细胞接种于96孔板中,以8、40、200、1000μg/mL矮壮素进行染毒。MTT法检测矮壮素染毒后不同时间（24、48、72h）MC3T3-E1细胞的相对存活率。实时荧光定量PCR法检测矮壮素染毒48 h后MC3T3-E1细胞中骨骼发育相关基因mRNA的表达情况,包括成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、生长激素受体（GHR）;破骨相关基因核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。使用Western blot测定矮壮素染毒48h后MC3T3-E1细胞中骨骼发育相关功能蛋白及MAPK信号通路蛋白的表达情况,包括碱性磷酸酶（ALP）、生长激素受体（GHR）、骨形成蛋白2（BMP2）、转录因子Runt相关蛋白2（Runx2）。结果:不同浓度矮壮素对MC3T3-E1细胞染毒不同时间均无明显细胞毒性;矮壮素染毒24h,1000μg/mL矮壮素染毒组细胞中ALP、OCN、RANKLmRNA表达明显增高（P<0.05）,且细胞中RANKL与OPG的mRNA表达量比值明显上升（P<0.05）,GHR、IGF-1、OPG、M-CSFmRNA的表达无明显变化（P>0.05）。1000μg/mL组MC3T3-E1细胞GHR和BMP2蛋白表达明显降低,磷酸化ERK蛋白表达量降低和磷酸化JNK蛋白表达量升高。结论:矮壮素对MC3T3-E1细胞无明显细胞毒性,但可能会抑制MC3T3-E1细胞向成熟成骨细胞的分化,且有可能促进破骨细胞分化;其作用机制可能与MAPK通路有关,磷酸化ERK降低和磷酸化JNK升高可能会抑制小鼠前成骨细胞骨骼发育相关蛋白的表达。
- 出版日期2018
- 单位公共卫生学院; 北京大学
