A型肉毒毒素鼠源中和单抗的制备与鉴定

作者：张秀娟; 李磊; 付楚溪; 汪建华; 熊向华^*; 张惟材^*

来源：军事医学, 2018, 42(09): 689-693.

• 肉毒杆菌毒素,A型
• 抗体,单克隆
• 中和试验
• 杂交瘤

目的制备并鉴定A型肉毒毒素(Bo NT/A)鼠源中和单克隆抗体。方法利用Bo NT/AHc抗原免疫小鼠筛选得到的55株杂交瘤细胞培养上清,通过小鼠中和实验(MNA)选出中和活性较高单抗,进行抗体分型并扩增抗体可变区基因;利用BALB/c小鼠制备腹水,通过辛酸-硫酸铵以及Protein-G亲和层析纯化,并进行ELISA、SDS-PAGE、Western印迹、截短实验、BIAcore、中和活性及中和剂量分析。结果筛选得到1株中和活性较高的小鼠单抗BAS51,其轻链为κ、重链为Ig G1,获得轻、重链可变区序列;小鼠腹水效价为7. 29×105,纯化抗体纯度> 95%;BAS51与抗原Bo NT/AHC亲和力常数为1. 53×109L/mol,可与HCC片段结合,为线性表位,中和活性为100 LD50/mg,中和剂量为66. 7 LD50/mg。结论得到1株具有较强中和活性的抗Bo NT/A小鼠源单抗,为A型肉毒毒素中和抗体的研发奠定了基础。

• 出版日期2018
• 单位哈尔滨商业大学; 沈阳师范大学