棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因的克隆、表达和酶学性质分析

作者：张桂敏; 饶犇; 叶戋; 马立新; 张先恩

来源：微生物学报, 2008, (06): 765-771.

• 木聚糖酶
• Verticillium dahliae
• 毕赤酵母
• 基因组步行PCR
• 简并引物 xylanase
• Verticillium dahliae
• Pichia pastois
• genome-walking PCR
• degenerate primer

【目的】从棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae中克隆木聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行异源表达,研究酶学性质。【方法】通过多序列比对设计简并引物,扩增出真菌V.dahliae木聚糖酶基因片段,再采用基因组步行PCR技术获得全长木聚糖酶基因序列。经BLAST比对并结合GT-AG原则分析,该基因含有一个大小为63bp的内含子,利用DpnI介导的缺失方法对含内含子的全长木聚糖酶基因进行剪接,获得该基因的全长cDNA。将克隆到的cDNA在毕赤酵母GS115进行了表达,重组酶经纯化后进行酶学性质分析。【结果】BLAST比对显示,该cDNA推测的氨基酸序列和已知木聚糖酶的最高一致性为72%...

• 出版日期2008
• 单位中国科学院武汉病毒研究所; 湖北大学