分子信标方法研究HIV-1整合酶3'加工反应动力学

作者：何红秋; 刘斌; 陈慰祖; 王存新

来源：中国生物工程杂志, 2012, (02): 76-81.

DOI：10.13523/j.cb.20120213

• HIV-1
• 整合酶
• 分子信标
• 3'加工
• 动力学 HIV-1 Integrase Molecular beacons assay 3′-processing Kinetic study

HIV-1整合酶催化病毒cDNA与宿主细胞基因组DNA的整合,是病毒在宿主细胞中增殖的一个关键酶。3'加工是整合酶催化整合过程的第一步反应,3'加工反应动力学的研究对整合酶催化机理研究和以整合酶为靶点的药物研发都具有重要意义。构建了野生型HIV-1整合酶重组质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过对包涵体变性、复性,纯化得到了整合酶蛋白。基于分子信标原理,设计了荧光和淬灭基团标记的DNA底物,通过荧光信号实时监测3'加工反应,对酶反应的动力学性质进行研究。结果表明,纯化的整合酶蛋白具有较高的活性,酶反应表现出显著的Mg2 偏好性。酶动力学研究(Km=131.79 nmol/L,Kcat=0.0...

• 出版日期2012
• 单位重庆市科学技术研究院; 北京工业大学