拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较

作者：郑小芬; 李晓霞; 黄金兰; 余方回; 刘妙玲; 范芳; 黄迎娣; 张玲; 周英彪^*

来源：生物技术, 2019, 29(01): 69-76.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0013

• 棉子糖
• 肌醇半乳糖苷合成酶
• 棉子糖合成酶
• 拟南芥
• 基因克隆
• 体外催化活性

[目的]基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础。[方法]RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物。[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28mmol/(mg·min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21mmol/(mg·min)。[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍。

• 出版日期2019
• 单位广东石油化工学院