牛miR-193a基因过表达和抑制的慢病毒构建及初步鉴定

作者：史梦婷; 孟露萍; 付强; 史慧君; 张辉; 任艳; 陈创夫

来源：生物技术, 2014, (03): 52-57.

• miR-193a
• 慢病毒
• 牛肾细胞
• 实时定量PCR miR-193a
• Lentivirus
• Bovine kidney cells
• Real-time quantitative PCR

目的:构建牛miR-193a过表达和抑制的慢病毒并进行初步鉴定。方法:根据miRBase数据库中牛miR-193a的前体序列设计引物;以MDBK细胞全基因组为模版,扩增pre-miR-193a和pre-miR-193a inhibitor基因;并克隆至慢病毒载体pLL3.7中;经酶切和测序鉴定后获得重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至HEK-293T细胞中;转染48h后,收集慢病毒并感染MDBK细胞;感染48 h后,观察MDBK细胞中绿色荧光的分布情况,并收集细胞,提取总RNA并合成cDNA,实时定量PCR检测miR-193a表达水平。结果:成功构建了过表达和抑制miR-19...

• 出版日期2014
• 单位石河子大学