慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化

作者：季茂胜; 黄峥兰; 黄世峰; 曾建明; 刘钉宾; 罗红伟; 曹唯希; 冯文莉

来源：中国生物制品学杂志, 2010, 23(04): 354-357.

DOI：10.13200/j.cjb.2010.04.24.jimsh.026

• 慢性粒细胞白血病
• Bcr/Abl基因
• OD域
• 原核表达
• 纯化

目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot分析后,用镍离子亲和层析柱纯化。结果所构建的重组质粒pTAT-OD-HA经PCR、双酶切及测序鉴定正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,诱导6h蛋白表达量达最高,约为10%;Westernblot分析显示,该蛋白可与鼠抗HA单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度约为95%。结论已成功原核表达并纯化了TAT-OD-HA融合蛋白,为进一步研究其在CML中的作用奠定了基础。

• 出版日期2010
• 单位重庆医科大学