禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定

作者：全炎铭; 崔红玉; 赵妍; 赵晓岩; 石星明; 高宏博; 闫帅; 张晓艳; 王玫; 王云峰

来源：中国预防兽医学报, 2011, 33(05): 335-339.

DOI：10.3969/j.issn.1008-0589.2011.05.01

• 鸡马立克氏病病毒
• gI和gE基因
• 禽源U6启动子
• siRNA Marek's disease virus
• gI and gE gene
• chicken U6-3 promoter
• siRNA

为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列。通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率。结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%。分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735...

• 出版日期2011
• 单位中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 东北农业大学; 动物科技学院