丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析

作者：张靖鹏; 江锦秀; 林裕胜; 游伟; 胡奇林^*

来源：福建农业学报, 2019, 34(10): 1124-1128.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002

• 丝状支原体山羊亚种
• 特异基因
• 原核表达
• 免疫原性

【目的】构建表达丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的重组表达菌,为Mmc-3740蛋白的进一步研究与应用奠定基础。【方法】采用PCR技术从Mmc-47中扩增出该基因,进行克隆、测序,将克隆质粒与pET-28a分别双酶切,回收正确的片段进行连接构建重组表达质粒,转化至表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,产物用SDS-PAGE检测,用镍柱对其纯化后免疫小鼠获得高免血清,并进行Western-blot验证。【结果】成功构建了克隆和表达载体,重组菌表达目的蛋白大小约21 ku。表达产物通过镍柱纯化后可得到单一的目的蛋白条带,Western-blot检测结果显示所表达的目的蛋白有较好的免疫原性。【结论】成功在BL21(DE3)宿主菌内表达了Mmc-3740重组蛋白。

• 出版日期2019
• 单位福建省农业科学院